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流式檢測一、項目介紹 流式細胞術是運用流式細胞儀對細胞或顆粒進行光譜鑒定、細胞分選、計數,廣泛用于分析細胞表面和細胞內分子的表達水平、鑒定樣品中細胞群的不同細胞類型、評估各細胞亞群的純度以及分析細胞大小和內含顆粒。主要利用熒光標記的抗體檢測蛋白水平,或結合了特定細胞分子的熒光染料,如PI與 DNA 的結合。 二、應用 常用于細胞表面分子如表面標記物的鑒定及水平分析,以鑒定、定性或定量特定類群的細胞,可以檢測細胞內蛋白表達水平,可以利用特定染料分析細胞周期、細胞凋亡,利用線粒體電位染料分析線粒體膜電位,利用DHE等染料檢測細胞內ROS水平。 三、檢測項目
四、實驗結果展示 1、細胞凋亡 2、細胞周期 3、流式JC-1檢測 4、PI染色 5、ROS檢測 6、表抗-單標 7、表抗-雙標 五、樣品保存運輸 流式樣本接收注意事項 、偌毎蛲 需要活細胞(外地樣本不接)。如果細胞帶熒光,一定要在交接單和培養(yǎng)板上備注,否則按照無熒光處理。如果因此導致檢測結果不可用及樣本浪費,我方概不負責,也不接受退單。 、诩毎芷 周期需要細胞量比較多,6孔板送樣要求匯合度在70%以上,但不能超過90%。外地樣品,需用預冷的70%乙醇固定過夜后(貼壁細胞需要消化后進行固定),離心棄固定液,加1ml PBS重懸,封口膜封好,4 ℃運輸寄到實驗室。 、哿魇絁C-1 需要活細胞(外地樣本不接)。細胞匯合度高于70%(6孔板),多提供2個空白孔,做陰性和陽性對照。如果細胞帶紅光或綠光,不能檢測。 、芰魇絉OS 需要活細胞(外地樣本不接)。細胞匯合度高于70%(6 孔板),多提供2 個空白孔,做陰性和陽性對照。如果細胞帶綠光,不能檢測。 ⑤細胞表抗 提前確定公司是否有相應流式抗體(組化抗體不可用),其他抗體需要客戶自己提供(外地樣本不接)。 、蘖魇饺龢 提前告知樣本具體數量和類型(血液或脾臟)。血樣用抗凝管收集(胞內染色至少需要1.5 ml,表抗需要約1 ml),注意防止凝血,4 ℃保存運輸。血樣4 ℃保存最多只能存放一周,時間越久實驗結果越差。取血后,需盡快寄到實驗室;取脾臟時盡量將動物帶到實驗室,直接在實驗室取材后開始實驗,若不能將動物帶到實驗室,取材(整個脾臟)后將組織放在含有PBS 的EP 管或離心管中,4℃保存,提細胞必須在取材后6 小時以內完成,注意有些檢測指標(Treg,TH1, TH2 等)需無菌提取。外地樣本不接。 上一篇類器官培養(yǎng)下一篇切片掃描 |